ПЛР гепатиту С: порядок забору крові, розшифровка показників, лікування, відгуки

Опубликованно 20.09.2018 02:16

Гепатит C – інфікування печінки, викликане вірусом Flaviviridae HCV, що складається з однієї або кількох молекул РНК. Як правило, проводять низку діагностичних заходів для встановлення у пацієнта гепатиту C. ПЛР є аналізом, точно підтверджує діагноз. Часто висновок надається лікарями, коли у хворого вже присутні перші ознаки захворювання. Що таке гепатит C

Ураження печінки вірусної інфекцією, що передається через кров або статевим шляхом, в медицині називається гепатит С. Збудником є РНК-містить вірус неклеточных інфекційних агентів сімейства Flaviviridae. Інфекція може довго знаходитися в організмі, ніяк себе не проявляючи. Тому лише при виявленні мікроорганізму за допомогою дослідження крові методом ПЛР РНК гепатит C (як діагноз) вважається обґрунтованим.

Флавивирус не продукується в штучно вирощених ізольованих клітинах. В процесі розмноження інфекційний агент створює імунологічно відмінні модифікації. Ці фактори заважають організму давати відповідний захисний відповідь, а у фахівців виникають труднощі з розробкою дієвої вакцини.

Передається вірус парентеральним способом. Для зараження необхідно його попадання в достатній кількості безпосередньо в кров. Які аналізи здають при гепатиті C

Вірусні патології печінки діагностуються за допомогою лабораторних тестів. Клінічні дослідження гепатиту C проводять методом вивчення чужорідних і небезпечних для організму антигенів або білкових сполук (антитіл) у біоматериалі пацієнта, в основному в крові. Імуноферментний аналіз (ІФА). Метод базується на виявленні в крові антитіл lgM. Імуноглобулін вважається найбільш великим і являє собою пентамер. Він проявляється при первинному захисному відповіді лімфоцитів на невідоме чужорідне речовина. Радіоімунологічних аналіз (РІА) – кількісне визначення імуноглобуліну lgM за допомогою позначеного радіоактивного ізотопу йоду. ПЛР гепатиту C – визначення в біоматериалі (крові) вірусної РНК. Даний аналіз достовірно підтверджує діагноз.

Дослідження на імуноглобулін G не є достовірним. Його наявність в сироватці крові може говорити не тільки про присутність флавивируса, так і про інший перенесеної інфекції, що має такого ж збудника.

Що визначає аналіз ПЛР

Полімеразна ціп'яка реакція (ПЛР) базується на встановленні ділянок ДНК, специфічних для деяких хвороботворних мікроорганізмів у зразках матеріалу для досліджень (епітелій, кров). Аналіз дає можливість визначити патогенні дрібні організми (віруси) за допомогою виявлення РНК або ДНК в біологічному матеріалі.

Лабораторна процедура щодо виявлення антитіл ПЛР гепатиту C проводиться в 3 етапи: Виділення. Досліджуваний біоматеріал очищають від домішок і отримують ДНК в рухомий фазі хроматографічної колонки. Ампліфікація. Аналіз проводять у приладі-термостаті амплификаторе. Він з певною циклічність нагріває і охолоджує пробірки. За одне дослідження проводиться до 35 циклів. У результаті виходить достатня кількість фрагментів ДНК для виявлення, ідентифікації та оцінки збудника. Електрофорез. Отримані фрагменти поміщають в гель з різною насиченістю агарози і проводять електрофорез. Отриману электрофореграмму аналізують на комп'ютері.

Застосовують не тільки стандартне дослідження ПЛР, але і аналіз Real Time PCR. Це діагностика в реальному часі. Метод дозволяє проводити якісний і кількісний аналіз, що дає можливість виявити структуру та динаміку хвороби, а також призначити терапію, спрямовану на ліквідацію причини походження патології. Також ПЛР в реальному часі застосовують для визначення чистої культури інфекційних агентів (генотипування).

Як здається аналіз на полімеразну ланцюгову реакцію

Для діагностики може бути використана будь-яка біологічна рідина людини. Біоматеріалом для дослідження на гепатит C зазвичай є кров.

Забір зразків для діагностики проводять в процедурному кабінеті. Для взяття крові використовують одноразові пробірки з речовиною, пригнічують її згортання. Заходи, зорієнтовані на запобігання розповсюдження збудників інфекції, допомагають уникнути попадання іншого штаму мікроорганізмів ззовні.

Кров на ПЛР гепатиту C здають вранці натщесерце. Пробу намагаються одразу доставити в лабораторію. Допускається зберігання біоматеріалу при температурі від +4 до +8 градусів Цельсія. Контейнери маркують і постачають напрямком. Результати аналізу можна отримати через 48 годин, іноді раніше. Види ПЛР

Спектр застосування полімеразної ланцюгової реакції досить широкий. Інфекціоністи визначають за допомогою ПЛР гепатит B, захворювання, що передаються комахами, СНІД, туберкульоз. В онкології з допомогою цього методу виявляють пухлинні клітини на ранніх стадіях.

Існує близько чотирнадцяти видів аналізу. Використання того чи іншого виду залежить від сфери застосування і кінцевих результатів аналізів. Деякі різновиди ПЛР незамінні там, де результат потрібен протягом 20 хвилин.

Для діагностики гепатиту C використовують 3 види полімеразної ланцюгової реакції: Якісна оцінка може бути або позитивною вказує на присутність в організмі інфекції, або негативною – відсутність флавивируса. ПЛР у реальному часі (кількісний аналіз) – визначає кількісний РНК збудника в МО/мл Генотипування – аналіз, що виявляє різновид (генотип) вірусу.

Для точного виявлення і визначення захворювання з подальшим призначенням оптимальної терапії застосовують усі три види досліджень.

Якісний аналіз полімеразної ланцюгової реакції

Аналіз призначають в обов'язковому порядку всім, у кого ІФА виявив антитіла до HCV. ПЛР якісний на гепатит C є стандартним тестом на чутливість. Метод спрямований лише на виявлення, ніякого підрахунку або виділення інших речовин не проводиться.

Для визначення антитіл використовують спеціальні тест-системи з порогом чутливості не нижче 50 МО/мл При виявленні антитіл призначаються інші уточнюючі аналізи. При негативному результаті подальші дослідження не проводяться.

У деяких випадках псевдонегативний результат може бути наслідком некомпетентності співробітників лабораторії або низькоякісними реагентами. Для страховки краще перездати аналіз в іншому місці.

Кількісний ПЛР

Метод застосовується для прямого дослідження числа флавивируса за один цикл реакції. Для точного вимірювання використовують фрагменти ДНК, що застосовуються для гібридизації, або флуоресцентно-мічені праймери. Існує економічний варіант детекції, із застосуванням барвника SYBL Green. Барвник вклинюється в невелику борозенку ДНК і при опроміненні лазером забарвлюється в синій колір.

Концентрація визначається апаратом-амплификатором в цифровому еквіваленті. У різних лабораторіях показники можуть трохи відрізнятися, тому їх необхідно порівнювати з референтними показниками.

Кількісний ПЛР гепатиту C допомагає підібрати оптимальну дозування лікарських засобів і визначити тривалість терапії. Частота проведення дослідження залежить від стадії захворювання, виду генотипу і призначеного курсу лікування. Визначення генотипу

Вірус гепатиту C має мінливе генетичну будову. Численні модифікації не дають можливість створити вакцину, а також ускладнюють терапію. Всього виявлено та зафіксовано 11 генотипів і 100 підтипів. В країнах колишнього СРСР у осіб, інфікованих гепатитом C, ПЛР виявляє в основному генотипи 1b і 3.

При наявності будь-якого з генотипів може гратися цироз або рак печінки. Тому так важливо виявити вірус вчасно.

Для деяких пацієнтів певні ліки, призначені для боротьби з HCV, є токсичними. Генотипування дозволяє визначити різновид білка і призначити ефективне лікарський засіб.

В результатах аналізів на типування стоїть цифра з малою латинською літерою, що вказує на генотип вірусу. У разі якщо HCV виявлений, але не типируется, це означає, що у людини невластивий для певної географічної зони генотип.

Результати аналізу

Розшифровкою результатів займається лікар. Тільки дані декількох досліджень (в сукупності з анамнезом і оглядом) можуть дати загальну реальну картину історії хвороби. У здорової людини тест на якісну реакцію в біоматериалі нічого не виявляє. Якщо вказано значення «виявлено» – інфікування підтверджується, а пацієнт потребує подальшої діагностики з подальшим лікуванням. Визначення числа збудників інфекції дає можливість оцінювати вірусне навантаження на організм. У нормі кількісного ПЛР гепатиту C збудник не виявляється. Показник до 8*10^5 розцінюється як низька навантаження і при грамотної терапії гарантує сприятливий результат. Більш високі значення потребують поглибленого обстеження та визначення тривалої терапії, за позитивний результат якої ніхто не ручається. Позитивні результати генотипування вказують, який саме генотип розпізнаний. Від'ємний результат свідчить або про відсутність флавивируса, або про наявність генотипу, який характерний для даного регіону. На що вказує позитивний аналіз ПЛР

Будь-яке серйозне захворювання вимагає комплексної діагностики. Позитивний ПЛР гепатиту C підтверджує діагноз, але прогнози можна робити лише після додаткових лабораторних і інструментальних досліджень.

Виявлення вірусу не дає повного уявлення про патології. Необхідно виявити його тип і характер, визначити, як він впливає на печінку та інші органи. Виявлення HCV на ранніх стадіях часто має сприятливий терапевтичний результат. Негативний ПЛР при позитивному ІФА

При спостереженні симптомів, властивих уражень печінки, є велика ймовірність того, що інфекції вже потрапила в організм. Тому слід звернутися до гепатологу або інфекціоніста. Фахівець у ході розпитувань збере анамнез і призначить необхідне обстеження.

Якщо за результатами досліджень на гепатит C ПЛР негативний, а імуноферментний аналіз позитивний, то це говорить про наявність в крові антитіл до флавивирусу. Зазвичай так буває, коли інфекція потрапила в організм у невеликій кількості, тому імунітет впорався з нею самостійно. Але такі люди все одно вважаються інфікованими і зобов'язані проходити обстеження кожні 6 місяців. Якщо з такими результатами аналізів людині відмовляють у безкоштовному медичному обстеженні, для збереження здоров'я краще здати ПЛР платно, а при позитивних показниках звернеться до фахівця для постановки діагнозу і призначення лікування. Переваги і недоліки методу

При встановленні діагнозу «гепатит C» ПЛР має ряд переваг: Виявлення збудника на ранніх стадіях. Точне визначення вірусу. Оперативність проведеної діагностики. Мінімальна ймовірність помилки. Висока чутливість.

Недоліки методу: Висока вартість аналізу. Для проведення тесту необхідні дороге обладнання, реагенти та висококваліфіковані медичні працівники. Всі разом складається в чималу суму. Жорсткі вимоги до транспортування біоматеріалу.

Лікування запалення печінки

Аналіз ПЛР на вірус гепатиту C вважається основоположним для постановки діагнозу, але не остаточним. Щоб терапія була ефективною, необхідний ряд додаткових лабораторних і інструментальних досліджень. Після проходження всіх діагностичних заходів лікар призначає лікування: Прописується дієта №5. Спиртне повністю виключається. Спільний прийом «Інтерферону» і «Рибавірину» протягом 25 днів. Курсовий прийом гепапротекторов «Ессенціале», «Карсил», «Фосфоглив». В особливих випадках застосовують дискретний плазмаферез.

Медикаменти, призначені гепатологом, застосовують регулярно, не змінюючи дозування. Тривалість прийому препаратів визначається лікарем після здачі контрольних аналізів. Після завершення курсу терапії необхідно відвідувати лікаря кожні півроку.

ПЛР-діагностика дозволяє виявити збудника гепатиту C на ранніх термінах. Це сприяє ефективності терапії і недопущення переходу захворювання в такі небезпечні форми, як цироз і гепатоцелюлярна карцинома. Автор: Оксана Скрипченко 3 Серпня, 2018

Категория: Здоровье